一、产品概述由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗FBW7多克隆抗体货号A301-720A经抗原亲和纯化制备以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类FBW7蛋白F-box/WD重复结构域蛋白7亦称FBXW7适用于免疫沉淀IP和蛋白质印迹WB应用是研究SCF E3泛素连接酶复合物介导的蛋白降解及肿瘤发生机制的关键工具。二、核心产品参数参数项目 | 具体规格靶标蛋白 | FBW7反应种属 | 人宿主来源 | 兔克隆类型 | 多克隆抗体形式 | 完整IgG免疫原区域 | 第1–50位氨基酸抗体亚型 | IgG标记类型 | 未标记纯化方式 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 人工作浓度 | 1000 µg/ml1 mg/ml保存温度 | 2 - 8 °C有效期 | 自收货之日起1年缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠三、推荐应用与实验条件3.1 应用稀释度汇总应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注免疫沉淀IP | 6 µg / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体蛋白质印迹WB | 1:5000 - 1:20,000 | 宽稀释范围建议从1:5000起始优化3.2 蛋白质印迹WB专用实验条件通用条件封闭液及抗体稀释液5% 牛奶-TBST一抗孵育方式过夜孵育不可缩短细胞裂解物Western Blot推荐二抗山羊抗兔IgG重链和轻链抗体货号A120-101P免疫沉淀产物的Western Blot推荐二抗抗兔IgG轻链HRP标记抗体封闭液补充需添加5%正常猪血清货号S100-020*重要提示使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链约55 kDa的交叉检测干扰确保目标蛋白信号的准确解读。*四、免疫原与表位信息4.1 免疫原区域本抗体免疫原对应人FBW7蛋白第1至50位氨基酸之间的区域。依据NP_361014.1GeneID 55294的编号体系该表位位于蛋白N端区域。4.2 表位位置抗体识别的特异性表位位于N端前50个氨基酸内。该区域包含F-box结构域的关键部分——F-box是介导与SKP1相互作用的核心基序对于SCF复合物的组装至关重要。五、生产与纯化工艺5.1 亲和纯化采用固定于固相载体上的FBW7特异性表位进行亲和层析纯化确保抗体针对目标N端区域具有高特异性和亲和力。5.2 浓度测定免疫球蛋白浓度采用比尔定律Beer’s Law测定计算依据为1 mg/ml IgG溶液在280 nm波长处的吸光度值为1.4。本产品浓度为1000 µg/ml1 mg/ml属于高浓度抗体适合需要高灵敏度的IP实验。六、储存与稳定性推荐储存条件2°C至8°C冷藏切勿冷冻冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失有效期自收货之日起1年缓冲液成分Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠作为防腐剂pH范围7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性运输建议冷藏运输避免反复温度波动七、使用注意事项1. 叠氮化钠警示缓冲液含0.09%叠氮化钠该化合物具毒性操作时请佩戴手套和护目镜避免接触皮肤或吸入气溶胶。2. 高浓度特性本抗体浓度为1000 µg/ml1 mg/ml属于高浓度制剂。进行IP实验时按6 µg/mg裂解物用量吸取少量即可建议使用低吸附吸头以提高移液准确性。3. IP用量计算推荐用量为6 µg抗体/mg总蛋白裂解物。示例若细胞裂解物总蛋白为2 mg则需加入12 µg抗体即12 µl因浓度为1 µg/µl。4. 二抗选择关键检测细胞裂解物WB时可使用识别重链和轻链的二抗如A120-101P检测IP产物WB时必须使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体并添加5%正常猪血清以降低非特异性背景。若使用常规抗兔IgG识别重链在50–55 kDa处会出现强烈的重链信号可能完全掩盖在该分子量附近的目标蛋白条带。5. 过夜孵育要求WB实验中一抗需过夜孵育建议4°C缓慢摇动请勿缩短至室温1–2小时否则可能显著降低检测灵敏度。6. pH兼容性本抗体储存于pH 7–8的缓冲液中与大多数WB和IP实验的生理pH条件兼容无需额外透析或缓冲液置换。*本说明书基于产品特性研究编写使用者应结合具体实验体系进行优化验证。*